Gold逆轉(zhuǎn)錄酶

貨號(hào)/規(guī)格：R3001/2,000U, R3002/10,000U

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Gold逆轉(zhuǎn)錄酶是通過(guò)基因重組技術(shù)改造M-MLV得到的耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更高的熱穩(wěn)定性，可在 37℃-55℃條件下合成第一鏈cDNA。同時(shí)該酶去除了RNaseH 活性，對(duì)于常見(jiàn)的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)抑制劑具有較高的耐受度，cDNA合成能力更強(qiáng)，可用于復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA逆轉(zhuǎn)錄，能夠合成較長(zhǎng)的cDNA 以及構(gòu)建高比例的全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)等。

產(chǎn)品組成

活性定義

以Poly (rA)·Oligo (dT)為模板/引物，在37℃，10 min條件下，使1 nmol的dTTP摻入酸性沉淀物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。

保存條件

-30~-15℃保存。

應(yīng)用舉例

第一鏈cDNA合成

1. 配制反應(yīng)體系

按以下體系于RNase-free的離心管中配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液： 

[1] 請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的引物：Oligo dT引物僅轉(zhuǎn)錄mRNA，Random Primer可轉(zhuǎn)錄所有類型的RNA，特異性引物僅轉(zhuǎn)錄特異的RNA片段。當(dāng)后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR時(shí)，建議混合使用Oligo dT和Random Primer各1 μl，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[2] 若產(chǎn)物后續(xù)進(jìn)行PCR反應(yīng)，則建議先對(duì)模板RNA進(jìn)行變性處理打開(kāi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，有助于提高逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的產(chǎn)量。配置以下反應(yīng)體系，于65℃加熱5 min，再置于冰上迅速冷卻2 min：

2. 設(shè)定程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

將上述混合物充分混勻后按以下條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：

[1] 僅當(dāng)使用Random Primer時(shí)需要此步，當(dāng)使用Oligo (dT)₁₅ Primer或特異性引物時(shí)無(wú)需進(jìn)行此步。

[2] 當(dāng)模板RNA具有復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)或者高GC含量時(shí)，可將溫度提高至50℃。

產(chǎn)物可立即進(jìn)行PCR、qPCR反應(yīng)，或保存于-20℃及以下環(huán)境中，并避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1. 請(qǐng)使用高質(zhì)量的RNA，保證逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的效率

2. 在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中注意防止RNase污染

本品僅供科學(xué)研究使用。