通用菌落PCR檢測(cè)試劑盒

Cat. #：P8011，P8012

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒利用PCR原理，結(jié)合本公司的快速DNA聚合酶（延伸速率20s/kb），設(shè)計(jì)適用性廣的最佳引物，優(yōu)化PCR反應(yīng)緩沖體系，同時(shí)簡(jiǎn)化檢測(cè)方法，可用于各種常用T載體克隆的篩選檢測(cè)。

產(chǎn)品組成

活性定義

一個(gè)活性單位（U）指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

-20℃保存。

質(zhì)量控制

純度檢測(cè)：經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)，產(chǎn)品不含脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測(cè)：PCR方法檢測(cè)本試劑盒無宿主殘余DNA，也無其他DNA污染，能有效完成PCR擴(kuò)增。

應(yīng)用舉例

1. 準(zhǔn)備樣品

將過夜培養(yǎng)的平板上的菌落編號(hào)后，用滅菌的牙簽挑取單克隆菌體的一部分至反應(yīng)體系中；或在1.5 ml EP管中分裝500 μl含有相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基，并做好標(biāo)記，用無菌牙簽提取單個(gè)菌落至上述培養(yǎng)基中，37振蕩（250-300rpm）培養(yǎng)4h，取1-2 μl菌液用于擴(kuò)增。

2. 配制反應(yīng)體系

請(qǐng)于冰上配置反應(yīng)體系，體系大小與組分用量與添加順序可調(diào)整：

*包含了上下游引物，擴(kuò)增大小約為：克隆片段+250 bp。

● 加入各組分后，請(qǐng)用槍頭反復(fù)吸吹幾次，充分混勻。

● 在一次配制多管需分裝時(shí)建議按（n+1）的反應(yīng)液量配制，以確保分配時(shí)的耗損不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)，同時(shí)選擇大于總體積的離心管便于混勻。

● 如需使用其他體積的PCR反應(yīng)體系，請(qǐng)按各組分比例縮減或增加各組分用量。

● 將混勻的各管短暫離心，置于PCR儀中。

3. 設(shè)定反應(yīng)程序進(jìn)行PCR反應(yīng)

● 設(shè)定PCR程序時(shí)，請(qǐng)根據(jù)目的片段大小決定延伸時(shí)間，如果目的片段大小為500 bp時(shí)，延伸時(shí)間為15 sec；500 bp-1 kb，延伸時(shí)間20 sec；目的片段>1 kb時(shí)，延伸時(shí)間按20s/kb計(jì)算。

3. 分析結(jié)果

反應(yīng)結(jié)束后取2-5 μl反應(yīng)產(chǎn)物與loading buffer混勻后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設(shè)備觀察目的條帶的擴(kuò)增情況。

注意事項(xiàng)

請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書提供的實(shí)驗(yàn)體系及實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)。

室溫下DNA聚合酶有一定的活性，為避免發(fā)生非特異性擴(kuò)增，請(qǐng)于冰上配置反應(yīng)體系，并且最后添加FS^TM Mix或模板DNA。

挑取菌落時(shí)，應(yīng)選擇單菌落，不要挑取太多菌體，以免影響PCR結(jié)果。

部分適用T載體參考下表：