PCR教學試劑盒（P8021-P8022）

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PCR教學試劑盒（P8021-P8022）

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P8021（30次 500 bp） P8022（ 30次 1,000 bp）

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產(chǎn)品詳細

PCR教學試劑盒

Cat. #：P8021，P8022

產(chǎn)品簡介

本試劑盒是按照教學實驗內(nèi)容設計的，符合標準擴增流程的，教學用PCR反應試劑盒。本試劑盒所提供的模板為插入特定大小DNA片段的PBluescipt SK（+）重組質粒；引物為根據(jù)所插入DNA序列和擴增片段大小不同設計的上下游引物。PCR結果可獲得特定大?。?/span>500 bp或1,000 bp）的PCR產(chǎn)物。

產(chǎn)品組成

Component	P8021 （500 bp，30次）	P8022 （1,000 bp，30次）
DNA模板	150 μl，500 bp	150 μl，1,000 bp
上游引物 (10 μM)	75 μl	75 μl
下游引物(10 μM)	75 μl	75 μl
dNTP混合物(2.5 mM)	150 μl	150 μl
Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl)	40 μl	40 μl
10×PCR緩沖液	500 μl	500 μl
超純水	1 ml	1 ml
說明書	1份	1份

活性定義

一個活性單位（U）指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

10×PCR緩沖液保存于4℃，其他成分-20℃保存。

質量控制

純度檢測：經(jīng)質量檢測，產(chǎn)品不含脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測本試劑盒無宿主殘余DNA，也無其他DNA污染，能有效完成PCR擴增。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調(diào)整：

Ordinal	Component	Volume (25 μl reaction volume)	Volume (50 μl reaction volume)	Volume (50 μl reaction volume，n管)
1	10×PCR緩沖液（Mg²⁺ Plus）	2.5 μl	5 μl	5×(n+1) μl
2	dNTPs（2.5mM）	2 μl	4 μl	4×(n+1) μl
3	上游引物 (10 μM)	1 μl	2 μl	2×(n+1) μl或a μl×(n+1)
4	下游引物 (10 μM)	1 μl	2 μl	2×(n+1) μl或a μl×(n+1)
5	Taq DNA聚合酶（2.5U/μl）	0.5 μl	1 μl	1×(n+1) μl或a μl×(n+1)
6	template DNA	2 μl	4 μl	4×(n+1) μl或a μl×(n+1)
7	超純水	16 μl	32 μl	32×(n+1) μl
8	石蠟油	如不能設置頂蓋溫度，需適量加入石蠟油。

● 加入各組分后，請用槍頭反復吸吹幾次，充分混勻。

● 在一次配制多管需分裝時建議按（n+1）的反應液量配制，以確保分配時的耗損不會影響實驗，同時選擇大于總體積的離心管便于混勻。

● 如需使用其他體積的PCR反應體系，請按各組分比例縮減或增加各組分用量。

● 組分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度實驗，如有調(diào)整，請注意調(diào)超純水的用量至相應的體系。

● 將混勻的各管短暫離心，置于PCR儀中。

2. 設定反應程序進行PCR反應

Stage	Temperature	Time	Number of Cycles
Initial Denaturation	94℃	3 min	1
Denaturation	94℃	30 sec	30
Annealing	55℃	30 sec
Extension	72℃	30 sec or 45 sec
Final Extension	72℃	5 min	1