DS5000 DNA Marker
產(chǎn)品名稱(chēng)
DS?5000
貨號(hào)規(guī)格
M1111/60次,M1112/60次×5
產(chǎn)品說(shuō)明
DS?5000是由9條雙鏈線狀DNA片段混合而成的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(DNA Marker/ DNA Ladder),適用于確定100 bp至5 kb的線性雙鏈DNA片段大小,指示帶為1000 bp,便于電泳后觀察。每條帶都通過(guò)嚴(yán)格的物理定量,可用于測(cè)定目的片段的大小和含量。
產(chǎn)品濃度為150 ng/μl。
條帶組成(bp)
100、250、500、750、1,000、1,500、2,000、3,000、5,000
建議上樣量
3-5 μl/次??筛鶕?jù)上樣孔大小選擇合適上樣量。
DSTM5000已預(yù)混上樣緩沖液,可直接進(jìn)行電泳分析。
建議電泳條件
8 cm 1 %瓊脂糖凝膠,
1×TAE,7 V/cm,45 min。
保存條件
常溫保存3個(gè)月,長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃。
各條帶含量
指示帶 150 ng/5μl
非指示帶 75 ng/5μl
● 對(duì)于非變性凝膠電泳,Marker是否需要DNA變性?
答:本公司Marker產(chǎn)品中只有Lambda DNA Marker為質(zhì)粒酶切產(chǎn)物,在電泳上樣前如加熱處理可獲得最佳效果,其余產(chǎn)品均不需點(diǎn)樣前加熱處理;另外電壓太高也會(huì)使凝膠過(guò)熱和DNA變性造成帶型異常。
● 當(dāng)DNA停留在凝膠點(diǎn)樣孔處時(shí)該怎么辦?
答:檢查膠濃度是否在適合分離DNA片段的范圍,點(diǎn)樣孔是否高質(zhì),確保電泳的正負(fù)極正確,檢查電泳緩沖液是否具有緩沖能力,確保DNA樣品的純度,如進(jìn)行PCR產(chǎn)物的純化,確保樣本中沒(méi)有或只存在少量的DNA結(jié)合蛋白或其他可與DNA結(jié)合的化合物。
● 為什么DNA條帶不理想?
答:影響電泳條帶的因素很多,如凝膠種類(lèi)或濃度不合適,質(zhì)量不佳;上樣量過(guò)多或過(guò)少;樣本的純度不高,鹽濃度過(guò)高;電泳緩沖液緩沖能力不足,有核酸酶污染;電泳條件不正確;染色不充分或不均勻;跑膠后沒(méi)有及時(shí)拍照。
● 為什么定量數(shù)據(jù)不正確以及如何準(zhǔn)確定量樣品?
答:樣品和Marker的上樣條件不同,參考條帶不正確,凝膠的不均勻染色或背景過(guò)高都會(huì)干擾凝膠定量結(jié)果。樣品DNA和Marker DNA在電泳前選用相同的上樣染料處理,調(diào)整樣品濃度,使其在凝膠中的含量與分子量最接近標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶,樣品DNA和Marker的上樣體積盡量接近,樣品用1×上樣緩沖液稀釋?zhuān)欢繒r(shí)以分子量最接近的標(biāo)準(zhǔn)條帶為參照物,分析樣品條帶的含量;利用凝膠圖像分析軟件,如SensiAnsys可對(duì)DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量,比目測(cè)條帶方法更精確。
● 為什么在變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠里電泳時(shí)會(huì)出現(xiàn)雜帶?
答:一般來(lái)說(shuō),雙鏈DNA Marker不推薦用于變性電泳,否則會(huì)產(chǎn)生非正常帶型,即出現(xiàn)所謂的雜帶。這種出現(xiàn)異型帶的現(xiàn)象,在100 bp以下的條帶極易發(fā)生。當(dāng)您的實(shí)驗(yàn)不可避免的要使用變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠進(jìn)行電泳時(shí),我們建議,將樣品和Marker選用同樣的變性上樣緩沖液進(jìn)行變性處理后上樣,以消除二級(jí)結(jié)構(gòu)。