Marker 11 DNA Marker

建議上樣量

3-5 μl/次?？筛鶕?jù)上樣孔大小選擇合適上樣量。

Marker 11已預(yù)混上樣緩沖液，可直接進(jìn)行電泳分析。

建議電泳條件

8 cm  1.7 %瓊脂糖凝膠，

0.5×TBE，5 V/cm，1h。

保存條件

常溫保存3個(gè)月，長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃。

各條帶含量

指示帶     125 ng/5μl

非指示帶   50 ng/5μl

●  對(duì)于非變性凝膠電泳，Marker是否需要DNA變性?

答：本公司Marker產(chǎn)品中只有Lambda DNA Marker為質(zhì)粒酶切產(chǎn)物，在電泳上樣前如加熱處理可獲得最佳效果，其余產(chǎn)品均不需點(diǎn)樣前加熱處理；另外電壓太高也會(huì)使凝膠過熱和DNA變性造成帶型異常。

●  當(dāng)DNA停留在凝膠點(diǎn)樣孔處時(shí)該怎么辦？

答：檢查膠濃度是否在適合分離DNA片段的范圍，點(diǎn)樣孔是否高質(zhì)，確保電泳的正負(fù)極正確，檢查電泳緩沖液是否具有緩沖能力，確保DNA樣品的純度，如進(jìn)行PCR產(chǎn)物的純化，確保樣本中沒有或只存在少量的DNA結(jié)合蛋白或其他可與DNA結(jié)合的化合物。

●  為什么DNA條帶不理想？

答：影響電泳條帶的因素很多，如凝膠種類濃度質(zhì)量；上樣量過多或過少；樣本的純度不高，鹽濃度過高；電泳緩沖液緩沖能力不夠，核酸酶污染；電泳條件不正確；染色不充分或不均勻；跑膠后沒有及時(shí)拍照。

●  為什么定量數(shù)據(jù)不正確以及如何準(zhǔn)確定量樣品？

答：樣品和Marker的上樣條件不同，參考條帶不正確，凝膠的不均勻染色或背景過高都會(huì)干擾凝膠定量結(jié)果。樣品DNA和Marker DNA在電泳前選用相同的上樣染料處理，調(diào)整樣品濃度，使其在凝膠中的含量與分子量最接近標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶接近，樣品DNA和Marker的上樣體積盡量接近，樣品用1×上樣緩沖液稀釋；定量時(shí)通常以分子量最接近的標(biāo)準(zhǔn)條帶為參照物，分析樣品條帶的含量；利用凝膠圖像分析軟件，如SensiAnsys可對(duì)DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量，比目測(cè)條帶方法更精確。

●  為什么在變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠里電泳時(shí)會(huì)出現(xiàn)雜帶？

答：一般來說，雙鏈DNA Marker不推薦用于變性電泳，否則會(huì)產(chǎn)生非正常帶型，即出現(xiàn)所謂的雜帶。這種出現(xiàn)異型帶的現(xiàn)象，在100 bp以下的條帶極易發(fā)生。當(dāng)您的實(shí)驗(yàn)不可避免的要使用變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠進(jìn)行電泳時(shí)，我們建議，將樣品和Marker選用同樣的變性上樣緩沖液進(jìn)行變性處理后上樣，以消除二級(jí)結(jié)構(gòu)。