Optimus? Hotstart Taq Mix

Cat. #：P2041，P2042，P2043，P2044

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Optimus? Hotstart Taq Mix是2×濃縮的PCR擴(kuò)增預(yù)混和溶液，含有Hotstart Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等PCR擴(kuò)增必需組分（模板與引物除外）。使用時(shí)，僅需在擴(kuò)增體系中加入模板和引物即可進(jìn)行PCR，大大簡(jiǎn)化操作過程，縮短操作時(shí)間，降低污染（加樣次數(shù)減少）同時(shí)，由于體系內(nèi)含有增強(qiáng)劑，能夠顯著增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的靈敏度。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可直接用于TA克隆。

Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一種創(chuàng)新型的類抗體技術(shù)修飾熱啟動(dòng)酶，該酶在室溫下活性被完全封閉，依賴溫度激活酶活性，可有效減少非特異性擴(kuò)增，具有非常高的特異性。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度可達(dá)5 kb（簡(jiǎn)單模板）。延伸速率為2min/kb（70-75℃，簡(jiǎn)單模板可達(dá)20s/kb）。該酶具有5'→3'聚合酶活性，無3'→5'外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先進(jìn)的生產(chǎn)技術(shù)，動(dòng)物源性DNA污染為零，穩(wěn)定性更強(qiáng)，具有抗體法熱啟動(dòng)酶不可比擬的優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，預(yù)變性時(shí)間縮短至3分鐘，工作效率比大多數(shù)化學(xué)修飾法熱啟動(dòng)酶更高，是一款非常新穎、實(shí)用的產(chǎn)品。

產(chǎn)品組成

本產(chǎn)品分含體系中包含溴酚藍(lán)、不含溴酚藍(lán)兩類。體系中包含溴酚藍(lán)的產(chǎn)品，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可直接電泳檢測(cè)。這兩類產(chǎn)品的擴(kuò)增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍(lán)的包裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質(zhì)量控制

純度檢測(cè)：經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)，產(chǎn)品不含脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測(cè)：PCR方法檢測(cè)無宿主殘余DNA，能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

應(yīng)用舉例

1. 配制反應(yīng)體系

請(qǐng)于冰上配置反應(yīng)體系，體系大小與組分用量與添加順序可調(diào)整：

[1] 引物終濃度建議范圍：0.1-1 μM。特異性差時(shí)可降低濃度，效率低時(shí)可提高濃度。

[2] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建議用量如下表（50 μl反應(yīng)體系）。

[3] 可單獨(dú)訂購(gòu)超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[4] 可單獨(dú)訂購(gòu)25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 設(shè)定反應(yīng)程序進(jìn)行PCR反應(yīng)

[1] 退火溫度應(yīng)根據(jù)Tm值較低的引物來設(shè)。

[2] 延伸時(shí)間按2min/kb來設(shè)最佳（簡(jiǎn)單模板可達(dá)20s/kb）。

3. 分析結(jié)果

反應(yīng)產(chǎn)物可直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設(shè)備觀察目的條帶的擴(kuò)增情況。如有需要，可進(jìn)行割膠回收。

無產(chǎn)物或產(chǎn)物量少的改進(jìn)措施有：1調(diào)整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴(kuò)增的成分，需要高倍稀釋（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高產(chǎn)量。

操作注意事項(xiàng)

1 本產(chǎn)品采用改進(jìn)的類抗體修飾技術(shù)，依賴溫度激活DNA聚合酶，能有效抑制非特異性結(jié)合，可在室溫下配置反應(yīng)體系。

2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，因此在PCR產(chǎn)物3'末端通常會(huì)加上1個(gè)多余的脫氧腺嘌呤核苷，可直接用于TA克隆。

引物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)

引物長(zhǎng)度一般在15-30個(gè)堿基之間；上下游引物3’末端避免互補(bǔ)，避免出現(xiàn)3個(gè)以上重復(fù)的G或C，或出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)，否則會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量盡量接近；Tm值控制在55-65℃之間，且上下游引物Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點(diǎn)、修飾等）是非模板匹配序列，不參與Tm值計(jì)算。

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