國產(chǎn)vs進(jìn)口，熒光定量PCR預(yù)混液真實(shí)測評

欄目：精品推薦發(fā)布時(shí)間：2019-11-14

2款國際大牌，3款國內(nèi)品牌，共5款探針法熒光定量PCR預(yù)混液，擴(kuò)增效率與特異性真實(shí)測評。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time qPCR）實(shí)驗(yàn)在分子生物學(xué)研究中越來越普遍。現(xiàn)在常用兩種熒光定量方法：SYBR Green I嵌合熒光染料法，和TaqMan探針法。染料法成本較低，使用方便，是最常用的熒光定量方法；探針法成本較高，但是定量結(jié)果更準(zhǔn)確。

挑選一款質(zhì)量好的擴(kuò)增產(chǎn)品對于實(shí)驗(yàn)結(jié)果有至關(guān)重要的作用。新手們對于如何判斷一款qPCR預(yù)混液的好壞有點(diǎn)迷茫，常常會出現(xiàn)一個(gè)誤區(qū)：擴(kuò)增效率越高越好。

為什么不是效率越高越好？產(chǎn)物的特異性怎么判斷？國產(chǎn)品牌和進(jìn)口品牌的差距在哪里？通過下面的實(shí)驗(yàn)就可以看出來。

測評開始

5種品牌的TaqMan探針法熒光定量PCR預(yù)混液，同時(shí)用相同的模板DNA和引物進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增曲線如下：

可以看出擴(kuò)增曲線都正常，除了國產(chǎn)品牌C的Ct值較大，即擴(kuò)增效率較低外，其余4個(gè)品牌的Ct值均接近。但是它們真實(shí)地反映了目標(biāo)產(chǎn)物的實(shí)時(shí)擴(kuò)增情況嗎？

我們對以上qPCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)產(chǎn)物大小可以直觀地判斷其特異性：

品牌A和品牌D的產(chǎn)物存在明顯的非特異性擴(kuò)增；品牌C的產(chǎn)物大小不正確，完全是非特異性擴(kuò)增；東盛生物（一款探針法和兩款染料法）和品牌B的產(chǎn)物是特異的。

通過對比我們發(fā)現(xiàn)，擴(kuò)增效率不是越高越好，產(chǎn)物特異才是最重要的！

首次使用的引物，不論是進(jìn)行染料法定量的，還是探針法定量的，都建議通過DNA電泳來直觀判斷其特異性。當(dāng)然，染料法定量的特異性也可以借助熔解曲線來判斷。

以上只是我們對比測評的一組結(jié)果，綜合多次、多品牌、多類型的對比結(jié)果，從整體水平來看，進(jìn)口大牌的qPCR預(yù)混液比國產(chǎn)品牌質(zhì)量更可靠，但也不是全部都表現(xiàn)很好。

東盛生物qPCR Mix不斷優(yōu)化升級，與眾多國際品牌對比均表現(xiàn)突出。

東盛生物熒光定量PCR預(yù)混液核心成分為類抗體技術(shù)修飾的熱啟動(dòng)酶，完美平衡了特異性與擴(kuò)增效率。

特異性過高會抑制擴(kuò)增效率，擴(kuò)增效率過高會降低特異性，因此保持特異性和擴(kuò)增效率在一個(gè)平衡的位置是qPCR Mix的技術(shù)難題。

東盛生物擁有超過十年的PCR技術(shù)研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)過反復(fù)嘗試，不斷優(yōu)化，得到了兼顧特異性與擴(kuò)增效率的qPCR Mix。

部分客戶發(fā)表文獻(xiàn)如下：

Fengxia Tu, Qiongyi Pang, et, al. Angiogenic effects of apigenin on endothelial cells after hypoxia-reoxygenation via the caveolin-1 pathway. International Journal of Molecular Medicine. 2017; 40 (6): 1639-1648. DOI: 10.3892/ijmm.2017.3159.

Yaping Nie, Hu Chen, et, al. Palmdelphin promotes myoblast differentiation and muscle regeneration. Scientific Reports. 2017; 7 (1): 41608. DOI: 10.1038/srep41608.