聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)由1983年美國Mullis首先提出設(shè)想,到至今,PCR已發(fā)展到第三代技術(shù)。
PCR擴(kuò)增流程圖:
在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中,利用冰上配制反應(yīng)體系,來盡量避免Taq酶在常溫有部分活性的問題,來解決引物錯(cuò)配和二聚體引起的非特異性擴(kuò)增等現(xiàn)象,但是無法完全解決非特異性產(chǎn)物,造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確性。熱啟動(dòng)型PCR能夠很好的解決上述問題,是最常用的提高PCR特異性的方法。
熱啟動(dòng)PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時(shí)才發(fā)揮作用的PCR。通過這種方式控制PCR反應(yīng)的必須組分DNA聚合酶,直到反應(yīng)混合物被加熱到可以阻止非特異引導(dǎo)和引物聚合的溫度后,再啟動(dòng)PCR達(dá)到有效擴(kuò)增特異性PCR產(chǎn)物的目的。
抗體法修飾熱啟動(dòng)酶原理圖:
熱啟動(dòng)PCR的應(yīng)用方面較為廣泛,不僅有效防止非特異性PCR產(chǎn)物,而且在較難擴(kuò)增的PCR反應(yīng)如單拷貝基因的擴(kuò)增、多重PCR和超長片段的擴(kuò)增等應(yīng)用尤為突出,大大改觀了傳統(tǒng)PCR技術(shù)的局限性。在病原微生物檢測、遺傳病診斷和法醫(yī)鑒定等各個(gè)領(lǐng)域等實(shí)際應(yīng)用中頗為廣泛。在應(yīng)對全球爆發(fā)的新冠疫情方面,熱啟動(dòng)酶亦貢獻(xiàn)頗多。目前市面上應(yīng)用于SARS-Cov-2的一步法RT-qPCR檢測試劑的核心酶基本都是抗體法熱啟動(dòng)酶。
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東盛一管式PCR預(yù)混液不僅使用方便,而且性能優(yōu)異,通過抗體修飾的熱啟動(dòng)改造進(jìn)一步提升了產(chǎn)品的特異性和擴(kuò)增效率等性能。
部分產(chǎn)品升級對比圖
高保真PCR--Pfu Mix——在保證保真度的基礎(chǔ)上顯著提高PCR擴(kuò)增效率:
高效率PCR--Plus Mix——在原有高擴(kuò)增效率的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高特異性:
染料法qPCR Mix ——抗體修飾升級,曲線更完美:
東盛生物專注研發(fā)與生產(chǎn)PCR相關(guān)產(chǎn)品17余年,客戶遍布海內(nèi)外40多個(gè)國家和地區(qū),產(chǎn)品涵蓋DNA聚合酶、PCR預(yù)混液、熒光定量qPCR預(yù)混液、一步法RT-qPCR預(yù)混液等產(chǎn)品,不僅可用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究,而且可作為核心工業(yè)原料賦予各類分子診斷產(chǎn)品精準(zhǔn)的檢測能力。
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